四眼斑龟性情胆小。一般喜栖于水底黑暗处，如石块下、拐角处。连续多次将鼻孔露出水面呼吸后，静伏于水底可达15-20分钟左右。每年4-5月初，水温15℃时少量活动，18℃左右时可见在水中游动。6-9月间随温度的上升，龟活动范围增大，中午喜趴在岸边伸展四肢晒甲。10月霜降后陆续进入冬眠。 11月水温13℃时龟进入冬眠，对触摸、振动、刺激反应迟钝。翌年1月水温10℃以下时龟进入深度冬眠，无排泄现象。